考慮色譜分離柱效時(shí)，要注意哪些問題
點(diǎn)擊次數(shù)：1856 更新時(shí)間：2022-06-17
色譜分離柱在使用前，更好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜分離柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是更佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
有效的辦法是純化樣品。我們在多年的分析工作中發(fā)現(xiàn)，凡是樣品純化的越干凈，分離柱的壽命就越長；反之，只有提取沒有純化的樣品，分離柱柱效下降較快。建立一個(gè)理想的色譜分析方法應(yīng)該有一套有效的樣品前處理方法，特別是在分析血漿和尿液樣品時(shí)，要特別注意樣品的提取與純化，盡量使處理過的樣品中雜質(zhì)降到較低，保護(hù)柱頭和柱子。
提取純化好的樣品最好用流動(dòng)相來溶解，一方面減少色譜圖中的溶劑峰干擾，另一方面也是檢查樣品在流動(dòng)相中的溶解性，如果樣品進(jìn)樣后在流動(dòng)相中沉淀，會(huì)堵塞進(jìn)樣器和柱頭，甚至樣品分解，出現(xiàn)怪峰。如果出現(xiàn)樣品與流動(dòng)相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件，如更換樣品溶劑，或改進(jìn)處理樣品的方法，或過濾，去除不溶性物質(zhì)。
在考慮色譜分離柱效時(shí)，需要特別注意以下幾個(gè)問題。
一、決定組分保留值的分配系數(shù)：分配系數(shù)K=溶質(zhì)在固定相中的濃度/溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度。K值小的組分在固定相中濃度小，所以容易隨流動(dòng)相運(yùn)動(dòng)而較早出峰，反則反之。
二、決定組分保留值的分配比(容量因子)：容量因子=組分在固定相中的量/組分在流動(dòng)相中的量。
三、選擇性因子α：即后出峰的組分的調(diào)整保留時(shí)間與先出峰的組分的調(diào)整保留時(shí)間的比值。
因?yàn)榻M分在色譜分離柱內(nèi)移動(dòng)時(shí)，會(huì)逐步產(chǎn)生擴(kuò)散，不利于分離，影響色譜分離柱的分離效率，所以塔板數(shù)高者好。使用過程中，當(dāng)塔板數(shù)降到一定程度時(shí)該柱就報(bào)廢了。
